| 细胞穿膜肽pep-1与vMIP-Ⅱ的融合表达与纯化 |
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| 引用本文： | 罗燕,谭晓华,狄春红,程建兵,陈佳红,杨磊.细胞穿膜肽pep-1与vMIP-Ⅱ的融合表达与纯化[J].广西农业生物科学,2010(6):1026-1032. |
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| 作者姓名： | 罗燕 谭晓华 狄春红 程建兵 陈佳红 杨磊 |
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| 作者单位： | [1]石河子大学新疆地方病与民族高发病省部共建教育部重点实验室,新疆石河子大学生命科学学院,石河子832002 [2]杭州师范大学医药卫生管理学院,杭州310036 |
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| 基金项目： | 浙江省科技厅国际合作重点项目（2008C14G2150010）; 杭州师范大学中青年培育基金（2010QN31）共同资助 |
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| 摘 要： | 细胞穿膜肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其穿膜能力不依赖经典的胞吞作用。本研究构建了含有细胞穿膜肽pep-1和病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ（viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ）的融合表达质粒pET15b-pep-1-vMIP-Ⅱ,并将其转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS中经IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定出可溶性的融合蛋白pep-1-vMIP-Ⅱ。通过对IPTG浓度、温度等诱导表达条件进行优化,确定在IPTG浓度为0.2mmol/L、28℃下诱导7h可溶性蛋白的表达量相对较高,经Ni-NTA亲和层析,超滤除盐纯化获得高纯度的融合蛋白pep-1-vMIP-Ⅱ,将该蛋白作用于Hela细胞,激光共聚焦显微镜观察结果显示该融合蛋白能够携带目的基因穿透细胞膜。本文结果将为进一步研究vMIP-Ⅱ的功能和细胞穿膜肽技术的应用奠定基础。
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| 关 键 词： | vMIP-Ⅱ pep-1 细胞穿膜肽 原核表达 |
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