3种去势疫苗的构建及稳定性研究

【目的】试验旨在构建不同种类的新型免疫去势DNA疫苗，分别为KISS1、神经激肽B(NKB)单表达基因疫苗和促性腺激素释放激素(GnRH)、KISS1和NKB 3个基因共表达的三表达基因疫苗，注射到动物体内后能激发免疫反应，产生相应的抗体，从而达到通过调控生殖轴来降低雄激素的目的。【方法】选取下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic pituitary gonadal axis)上的GnRH及其上游调控基因KISS1和NKB作为靶标，并引入平衡致死系统代替抗生素筛选构建重组质粒，其中三表达重组质粒借助2A肽的自剪切功能使目的基因共表达。将重组质粒转染293T细胞后提取细胞RNA,验证其能否在机体内正常表达，随后将构建成功的质粒电转到减毒猪霍乱沙门菌(Salmonella Choleraesuis)C500感受态细胞中，获得重组活菌疫苗，构建的工程菌在体外连续传代50次，选取第0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究。【结果】重组质粒pVAX-2A/KISS1-asd、pVAX-2A/S-NKB-asd和pVAX-S/GnRH-2A/S-NKB-2A/KISS...