承德无角山羊耳成纤维细胞系的建立与冷冻保存研究

【目的】试验以甜菜碱作为冷冻保护剂对承德无角山羊耳成纤维细胞系进行冷冻保存，旨在优化冷冻保护效果，以期在细胞水平上长期保存这一地方品种家畜的遗传资源。【方法】采用组织块培养法建立承德无角山羊耳成纤维细胞系，利用甜菜碱作为冷冻保护剂对其进行玻璃化冷冻，以不同浓度(5%、10%、15%、20%及25%)甜菜碱为试验组，以不同浓度(10%和20%)二甲基亚砜(DMSO)为对照组，对承德无角山羊耳成纤维细胞进行冷冻，复苏后检测细胞的存活率、增殖活力以及细胞中B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达量，同时评估甜菜碱的毒性。【结果】本研究建立的承德无角山羊耳成纤维细胞系生长态势良好，细胞纯度较高，细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性，生长曲线呈S型，达到了建立成纤维细胞系的要求；当甜菜碱浓度为15%时细胞存活率最高，达90.86%,极显著高于对照组(P<0.01),细胞增殖活力及Bcl-2/Bax基因表达量均显著高于对照组(P<0.05),且甜菜碱的毒性远低于传统冷冻保护剂DMSO(P<0.05)。【结论】试验成功以甜菜碱作为单独的冷冻保...