| 牦牛ATG5多克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 高翔,潘阳阳,王萌,焦正兴,王靖雷,马文斌,王军乾,余四九,崔燕,王立斌.牦牛ATG5多克隆抗体的制备及应用[J].中国兽医学报,2023(10):2093-2100. |
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| 作者姓名： | 高翔 潘阳阳 王萌 焦正兴 王靖雷 马文斌 王军乾 余四九 崔燕 王立斌 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 甘肃省自然科学基金资助项目(22JR5RA864)；;国家自然科学基金资助项目(32160850)； |
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| 摘 要： | 为了进一步研究自噬在牦牛生殖活动中发挥的作用，本研究通过合成牦牛自噬相关5(autophagy related 5,ATG5)基因，并将合成的基因插入pET-32a质粒，转化BL21(DE3)感受态细胞，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-Thiogalactoside, IPTG)诱导表达ATG5重组蛋白并纯化，免疫日本大耳白兔，制备牦牛ATG5多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体的效价，蛋白质印迹(Western blot, WB)技术检测多克隆抗体的特异性。通过Western blot、免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)和免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)应用所制备的抗体检测ATG5蛋白在牦牛生殖器官中的表达。结果成功构建了pET-32a-ATG5原核表达质粒，转化大肠杆菌IPTG诱导获得了大小约为53 kDa(含His和Trx标签)的重组蛋白；制备的牦牛ATG5多克隆抗体效价为1∶1 280 000,特异性良好。应用显示，ATG5蛋白在牦牛睾丸和输卵管中均有表达。本研究成功制备了牦牛ATG5多...
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| 关 键 词： | 牦牛 ATG5 原核表达 多克隆抗体 自噬 |
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