鸡源九次跨膜蛋白TM9SF2基因克隆及其蛋白特征分析

根据鸡九次跨膜超家族成员2(chicken transmembrane 9 superfamily 2,chTM9SF2)预测序列设计引物，以原代鸡胚成纤维细胞CEF、鸡成纤维细胞系DF1和鸡肝癌细胞LMH的cDNA为模板，采用PCR方法扩增chTM9SF2编码序列，并利用MEGA 7.0、Clustal W、SWISS-MODEL等生物信息学工具对鸡、鸭、人、鼠等不同物种来源的九次跨膜超家族成员2(transmembrane 9 superfamily 2,TM9SF2)进行遗传进化、同源性、结构域及结构模拟等分析；进而通过构建真核表达质粒，利用Western blot、激光共聚焦显微镜探究chTM9SF2的表达和亚细胞定位。结果显示，分别在3类细胞中均可成功获得编码序列一致的chTM9SF2基因，与禽类的同源性最高，且高度保守；该基因能够在DF-1细胞中表达，且主要定位于晚期内体或溶酶体膜。结果表明，成功扩增获得chTM9SF2基因，并在DF-1细胞成功表达，分析其定位于晚期内体或溶酶体膜，为进一步研究chTM9SF2的生理功能及在病原感染中的作用奠定了基础。