SADS-CoV S1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

猪急性腹泻综合征(SADS)是由猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)引起的仔猪急性腹泻、呕吐、脱水、体质量骤降，最终导致死亡的一类急性传染病。为制备SADS-CoV刺突蛋白(S1)的多克隆抗体，通过PCR扩增得到SADS-CoV S1基因片段，并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建出重组质粒pGEX-6p-1-S1。测序结果正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，经GST标签凝胶纯化。纯化的S1蛋白与弗氏佐剂混合后经3次皮下注射免疫BALB/c小鼠后收集血清，通过免疫印迹试验(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)进行检测。结果表明，重组的S1蛋白具有良好的反应原性和免疫原性，制备的鼠抗S1蛋白多克隆抗体也具备良好的反应活性和特异性，为后续SADS-CoV血清学诊断方法的建立及S1蛋白生物学功能研究奠定基础。