| 利用CRISPRi技术敲低海分枝杆菌PPE13基因 |
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| 引用本文： | 王垚垚,毕斯琪,陈标,宋厚辉,杨杨.利用CRISPRi技术敲低海分枝杆菌PPE13基因[J].中国兽医学报,2023(8):1670-1676. |
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| 作者姓名： | 王垚垚 毕斯琪 陈标 宋厚辉 杨杨 |
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| 作者单位： | 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(32272951)；;浙江省自然科学基金资助项目(LY21C180001)； |
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| 摘 要： | 为研究分枝杆菌PPE13基因在宿主细胞的生物功能，本试验利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference, CRISPRi)构建海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株。CRISPRi主要包括表达失活的Cas9蛋白(dead cas9,dCas9)和特异性单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),通过形成复合体特异性识别相应DNA序列并抑制目的基因的转录。用无水四环素(anhydrotetracycline, ATC)诱导海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株，提取细菌RNA,利用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)技术检测dCas9、PPE13基因的表达情况，观察细菌在不同时间D600 nm的变化，分析诱导剂质量浓度和目的基因转录水平之间的关系。使用PPE13敲低菌株感染巨噬细胞并检测胞内菌的存活情况。结果表明，在ATC诱导后，dCas9表达水平显著增...
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| 关 键 词： | CRISPRi 海分枝杆菌 PPE13 敲低 |
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