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| D型流感病毒NP蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | |
| 作者姓名： | 肖雨晴 程娇娇 孙锐瑶 陈妍希 谯薇美 尹鑫 远立国 李守军 卢刚 |
| 作者单位： | 1. 华南农业大学兽医学院广东省兽医临床重大疾病综合防控重点实验室;2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 基金项目： | 黑龙江省博士后科研启动金资助项目(LBH-Q21199)； |
| 摘 要： | 该研究旨在对D型流感病毒(influenza D virus, IDV)NP蛋白进行原核表达并制备多克隆抗体，为D型流感快速诊断技术奠定基础。采用PCR技术扩增D/bovine/Mississippi/c00046N/2014毒株的NP片段编码区，并对其序列进行跨膜区、信号肽、疏水键、抗原性及结构域分析，筛选出最优区段以制备多克隆抗体。该研究将IDV NP最优编码区序列插入原核表达载体pET-B2M,构建pET-B2M-NP重组阳性质粒，经PCR和测序鉴定后将重组阳性质粒转化至大肠杆菌TreliefTM 5α中；IPTG诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化重组NP蛋白，并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。序列分析结果显示，1～500氨基酸区段无跨膜区和信号肽序列，局部亲水性好且具备良好的免疫原性，为制备重组NP蛋白的最佳抗原区段。经测序验证构建了pET-B2M-NP重组阳性质粒，转化后经IPTG诱导，主要以包涵体的形式表达了相对分子质量大小约为72 kDa的蛋白，符合预期。间接ELISA结果显示，制备的多克隆抗体效价达1∶100000且免疫原性良好。Western blo... |
| 关 键 词： | D型流感病毒 NP蛋白 原核表达 多克隆抗体 |