牛源犬新孢子虫NcGRA9基因原核表达及免疫原性分析

为了确定牛源犬新孢子虫NcGRA9基因的功能及表达蛋白的免疫原性,本试验PCR扩增牛源犬新孢子虫NcGRA9基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcGRA9和原核表达质粒pGEX-4T-NcGRA9,转化大肠杆菌BL21感受态细胞中IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达重组蛋白的反应原性,应用重组蛋白与弗氏佐剂混合接种BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平以及IFN-γ、IL-4细胞因子水平。结果显示,经PCR扩增获得522 bp的NcGRA9片段,表达蛋白纯化后相对分子质量约为45 kDa,具有良好的反应原性;重组蛋白接种BALB/c小鼠后,免疫组小鼠IgG、IgG1、IgG2a抗体水平以及IFN-γ、IL-4细胞因子水平均极显著高于PBS对照组(P<0.01),说明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验表达的NcGRA9重组蛋白具有良好的抗原性,为新孢子虫病的防控奠定了基础。