麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化

【目的】本文拟进行麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的载体构建及遗传转化。【方法】首先利用gateway方法进行GsAS2的RNAi载体(pK7GWIWG-GsAS2)和过表达载体(pK7WG2D-GsAS2)的构建,并利用基因枪转化麻花艽胚性愈伤组织,经卡那霉素(Kan)筛选后,进一步用35S启动子引物进行抗性植株总DNA的PCR检测。【结果】获得GsAS2的RNAi阳性植株5株,过表达植株8株,转化频率分别为2.94%和4.00%。对转基因植株进行GsAS2的半定量RT-PCR分析和齐墩果酸的HPLC测定表明:GsAS2的表达在RNAi系中受到较大抑制,其齐墩果酸含量均低于对照(为对照的48.5%~80.7%),而在过表达系中GsAS2则超量表达,且齐墩果酸含量均高于对照(为对照的1.67~2.46倍)。【结论】说明GsAS2的表达与下游产物齐墩果酸的含量关系密切。