噬菌体Bp7穿孔素holin的克隆、表达及其活性分析

为了研究噬菌体Bp7穿孔素holin的特征及其对细菌的抑制作用,根据噬菌体Bp7的基因序列,设计引物PCR扩增穿孔素holin基因,并对其序列进行比对和分析。构建holin原核重组表达质粒pCold-holin,在大肠杆菌BL21中诱导表达,摸索最佳表达条件。亲和层析法纯化蛋白质,并对其抑菌活性进行测定。结果表明,噬菌体Bp7的holin蛋白含有一个跨膜区,属于Phage-holin-T家族;在E.coli BL21表达的重组holin蛋白以可溶性形式存在。表达菌E.coli BL21浊度测定试验结果表明holin蛋白的表达在4h内能够显著抑制表达菌E.coli BL21的增殖,活菌数减少,菌体出现凝集现象。研究结果提示噬菌体Bp7的holin蛋白具有抑菌活性,这将为进一步研究穿孔素的抑菌机制奠定基础。