乙型脑炎病毒NS1′蛋白移码序列的鉴定

本文通过对猪乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）基因组中移码序列分析,设计合成三条引物,通过PCR扩增出假定的NS1′移码片段,并将移码片段三倍重复克隆入pET-28a表达载体中。重组质粒转化E．coliBL-21后,经IPTG诱导在37℃下实现目的片段的可溶性表达。纯化表达产物,并免疫小鼠制备了多抗血清,以多抗血清为一抗,对JEv感染的Vero细胞进行免疫荧光分析,结果发现抗移码片段表达蛋白的血清可识别JEV蛋白。以JEV感染Vero细胞,提取感染细胞总蛋白,分别以NSl单抗和VAI-制备的多抗血清为一抗,进行Westernblot分析。结果显示,NS1单抗为一抗,可染出48kDa的NS1条带和56kDa的NS1′条带：而以多抗血清为一抗,仅染出56kDa的条带。上述结果显示,多抗血清识别的NS1′蛋白为NS1′移码后片段表达的蛋白。