| PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 王国栋,邓小芸,刘书梅.PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库的构建及鉴定[J].广西农业科学,2013(8):1372-1376. |
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| 作者姓名： | 王国栋 邓小芸 刘书梅 |
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| 作者单位： | [1]安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳455000 [2]黑龙江职业学院动物医学学院,哈尔滨150080 |
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| 基金项目： | 河南省重点科技攻关项目（132102110006）. |
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| 摘 要： | 【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库，为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA，先后合成第一链和第二链cDNA，经平末端修饰后，定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头，再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消化，与噬菌体载体臂相连，然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装，形成初级cDNAT7噬菌体展示文库，并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量。【结果】经噬斑试验鉴定，初级文库滴度为2．0×10^5PFU／mL，扩增后滴度达6．0×10^10PFU／mL。PCR鉴定结果显示，文库的重组率为95．83％，且插入片段主要分布于500-2000bp，其中500～750bp的占21．73％，750～100bp的占21．73％，1000-2000bp的占39．13％。随机挑选20个克隆进行测序，发现均为猪源序列。【结论】构建的PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率，质量良好，符合后续文库筛选的要求，可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用。
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| 关 键 词： | PK15细胞 cDNA T7噬菌体展示文库 构建 鉴定 |
Construction and identification of T7 phage display cDNA library of PK15 cells |
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| WANG Guo-dong,DENG Xiao-yun,LIU Shu-mei.Construction and identification of T7 phage display cDNA library of PK15 cells[J].Guangxi Agricultural Sciences,2013(8):1372-1376. |
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| Authors: | WANG Guo-dong DENG Xiao-yun LIU Shu-mei |
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| Institution: | 1 School of Biology and Food, Anyang Institute of Technology, Anyang, Henan 455000, China; 2College of Veterinary Medicine, Heilongjiang Polytechnic, Harbin 150080, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PK15 cells eDNA T7 phage display library construction identification |
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