| 禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 万春和,陈翠腾,傅秋玲,等. 禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2016, 44(8): 49-54 |
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| 作者姓名： | 万春和 陈翠腾 傅秋玲 等 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院 畜牧兽医研究所 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建省农业科学院 畜牧兽医研究所 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建省农业科学院 畜牧兽医研究所 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 国家现代水禽产业体系项目（CARS-43）；福建省属公益类项目（2015R1023-7）；福建省农业科学院“青年科技英才百人计划”项目（YC2015-12）；福建省农业科学院青年人才创新基金项目（2014QA-7） |
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| 摘 要： | 【目的】建立禽坦布苏病毒(Avian Tembusu virus,ATmV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据ATmV非结构蛋白NS1的基因特征,设计特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和之前建立的RT-PCR方法同时对临床15份疑似ATmV感染的病料进行检测,计算其符合率。【结果】成功建立了检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,当NS1基因含量为(2.67×102)~(2.67×107)拷贝/μL时有良好的线性扩增,其扩增相关系数为0.998,扩增效率为99.9%。建立的ATmV实时荧光定量PCR检测方法敏感度高,最低检测限为2.67×102拷贝/μL;特异性强,对水禽常见病毒(如Ⅰ型鸭肝炎病毒、新型鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、禽Ⅰ型副粘病毒与番鸭细小病毒等)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.39%~1.17%和0.51%~1.82%。对临床送检的15份病料,TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的阳性率为73.33%(11/15),RTPCR方法的阳性率为60.0%(9/15),2种方法的符合率为100.0%。【结论】建立了基于TaqMan探针的ATmV实时荧光定量PCR检测方法,该方法可应用于ATmV感染的早期检测。
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| 关 键 词： | 禽坦布苏病毒；NS1基因；TaqMan；实时荧光定量PCR方法 |
| 收稿时间： | 2014-12-16 |
Development of a TaqMan-based real-time PCR method for avian Tembusu virus |
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| WAN Chunhe,CHEN Cuiteng and FU Qiuling,et al. Development of a TaqMan-based real-time PCR method for avian Tembusu virus[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2016, 44(8): 49-54 |
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| Authors: | WAN Chunhe CHEN Cuiteng FU Qiuling et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | avian Tembusu virus NS1 gene TaqMan real time PCR method |
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