犬冠状病毒核酸探针的制备及其基因序列的测定与比较

采用RT—PCR方法扩增犬冠状病毒(CCV)YSl、CI1和NL—18株5’端部分S基因序列，以随机插入DNA法对CCV YSl株纯化的PCR产物标记^32P同位素，制备核酸探针，并与3株CCV反转录产物杂交。用平端连接法将3株CCV PCR产物克隆于pUCl9 SmaI位点或pGEM—T载体中，经PCR鉴定为正确重组质粒。以双脱氧末端终止法测定了重组质粒的cDNA核苷酸序列，并用DNASIS计算机软件进行多重比较分析，绘制系统树。结果表明，所制备的核酸探针可与3株CCV反转录产物杂交，其核苷酸序列与多株CCV相应序列的同源性高达91．9％-99．1％，为CCV的保守区。由此说明，制备的酸破探针可用于犬CCV感染的分于流行病学研究。