| PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 郑逢梅,赵 军,霍金耀,等.PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表达及ELISA方法的建立[J].中国兽医学报,2014(3):371-378. |
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| 作者姓名： | 郑逢梅 赵 军 霍金耀 等 |
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| 作者单位： | ;1.河南农业大学 |
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| 摘 要： | 为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白抗体的ELISA方法,应用RT-PCR从腹泻仔猪样本中扩增获得了1段PEDV河南流行毒株N基因全长序列,根据对其氨基酸序列的抗原性分析结果,将N基因上2个大的抗原表位区(112321位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32α,构建pET-32α-N重组质粒并转化至宿主菌BL21(DE3)中。将重组菌在37℃条件下加入IPTG进行诱导使该蛋白获得了高效表达,表达产物为融合蛋白,相对分子质量约41 300。Western-blot分析表明,所表达的蛋白可与抗PEDV全病毒小鼠阳性血清发生反应。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,抗原最佳包被量0.226μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,二抗最佳稀释度为1∶2 000,待检血清D450值≥0.28判定为阳性。国内首次用该方法对临床猪血清样本进行了检测,母猪血清PEDV抗体阳性率为84.26%(166/197),仔猪血清阳性率为27.93%(31/111)。结果表明,建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好,可用于临床上PEDV抗体水平的监测和PED流行病学调查。
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| 关 键 词： | PEDV N基因 原核表达 免疫原性 间接ELISA 抗体监测 |
Prokaryotic expression of N gene major antigen region of PEDV and development of an indirect ELISA based on expressed protein |
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