| Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae |
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| 引用本文： | 刘延琳,蒋思欣,何秀萍,李 华,张博润. Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae[J]. 勤云标准版测试, 2005, 0(4) |
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| 作者姓名： | 刘延琳 蒋思欣 何秀萍 李 华 张博润 |
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| 作者单位： | [1]西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西杨凌712100 [2]中国科学院微生物研究所，北京100080 |
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| 基金项目： | 陕西省自然基金及西北农林科技大学科研专项资助. |
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| 摘 要： | 苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。
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| 关 键 词： | 重组表达质粒 leA基因 酿酒酵母 构建 球菌 L-苹果酸 乳酸含量 L-乳酸 显著性分析 转化子 重组质粒 调控元件 强启动子 穿梭质粒 大肠杆菌 筛选鉴定 PAGE 目的基因 杂交检测 HPLC MLF 酶基因 终止子 酵母菌 亮氨酸 色氨酸 |
Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae |
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| Liu Yanlin,Jiang Sixin,He Xiuping,Li Hu,Zhang Borun. Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae[J]. , 2005, 0(4) |
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| Authors: | Liu Yanlin Jiang Sixin He Xiuping Li Hu Zhang Borun |
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| Abstract: | Malolactic enzyme is the function enzyme to turn L-malic acid into L-lactic acid during malolactic fermentation (MLF). In this paper, mleA gene encoding for malolactic enzyme from pLmleA, PGK1 promoter from plasmid pVC727-6 and ADH1 terminator from plasmid |
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| Keywords: | Oenococcus oenizz Malo-lactic enzyme genezz Recombinant expression Plasmidzz Saccharomyces cerevisiaezz |
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