鸡TNNI2基因的真核表达载体构建及功能生物信息学分析

【目的】构建鸡快骨骼肌亚型肌钙蛋白I基因(fast skeletal muscle troponin I,TNNI2)的真核表达载体,并在永生化鸡前脂肪细胞系(immortalized chicken preadipocyte cell line,ICP1)细胞中转染和鉴定。【方法】利用RT-PCR方法获得鸡TNNI2基因的全长CDS区序列,采用定向克隆的方法构建该基因的真核表达载体,并对基因序列进行功能生物信息学分析,构建系统发育树。【结果】TNNI2基因ORF全长552 bp,编码183个氨基酸,蛋白质分子量大小为21.24 ku,理论等电点(pI)为9.19;fsTnI蛋白无信号肽和跨膜区,亚细胞定位于细胞核,属于亲水性不稳定蛋白质;磷酸化预测含有14个磷酸化位点;二级结构主要以α螺旋的形式存在;同源性比对结果表明:不同物种间的TNNI2基因具有较高的同源性。【结论】本研究成功构建了TNNI2基因的真核表达载体pCMV-HA-TNNI2,并成功转染ICP1细胞系,本结果可为进一步研究鸡TNNI2基因的功能奠定基础。