猪微小RNA-15b前体突变对其生物学加工过程及前体脂肪细胞分化的影响

基于在猪微小RNA-15b(miR-15b)前体（pre-miR-15b）基因位点第58位碱基上发现了1个C>T突变（+58C>T），本试验旨在探究此突变对微小RNA(miRNA)生物学加工过程以及对猪前体脂肪细胞分化的影响。试验通过构建野生型（pmR-miR-15bW）和突变型（pmR-miR-15bM）miR-15b过表达载体，分别转染猪原代前体脂肪细胞进行miR-15b的过表达试验，然后利用实时荧光定量PCR对比2组细胞pre-miR-15b和miR-15b成熟体的表达量，在体外细胞水平明确+58C>T对miR-15b生物学加工过程的影响；随后，诱导转染了不同基因型miR-15b过表达载体（pmR-miR-15bW和pmR-miR-15bM）的猪前体脂肪细胞成脂分化，利用实时荧光定量PCR对比2组细胞miR-15b靶基因叉头框蛋白O1(FOXO1)（可抑制脂肪细胞分化）以及成脂分化相关基因的相对表达量，同时结合油红O染色，明确此突变对猪前体脂肪细胞分化的影响。结果表明：2组细胞miR-15b初级转录本（pri-miR-15b）的表达量没有显著差异（P>0....