| Cry1Ab13杀虫基因的PCR诱变及功能验证 |
| |
| 引用本文： | 闫 鸽,宋 阳,张宇婷,等. Cry1Ab13杀虫基因的PCR诱变及功能验证[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2018, 46(5): 141-148 |
| |
| 作者姓名： | 闫 鸽 宋 阳 张宇婷 等 |
| |
| 作者单位： | 吉林农业大学农学院;延边大学农学院 |
| |
| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08004-004) |
| |
| 摘 要： | 【目的】通过易错PCR技术克隆一种新的Cry1Ab13基因,以利用Cry类Bt基因提高作物抗虫性,丰富基因资源。【方法】利用易错PCR技术对苏云金芽孢杆菌Cry1Ab13基因进行随机诱变,构建突变体文库,筛选获得突变株Cry1Ab13-1,将该基因构建原核重组表达载体后转化到大肠杆菌中进行异源表达,并利用表达的目的蛋白进行抗虫鉴定。【结果】序列分析表明,突变株Cry1Ab13-1基因序列全长2 036bp,与原始碱基序列的一致性为97.79%,有2个碱基发生突变,导致该基因编码的氨基酸序列中有2个氨基酸改变,分别是第130位由脯氨酸变成丝氨酸,第383位由丝氨酸变成苏氨酸;改变后的氨基酸序列与原始氨基酸序列一致性为96.97%。在线分析表明,该基因与已知过敏源的序列同源性低于35%,不存在致敏性。SDS-PAGE电泳分析表明,表达蛋白分子质量大小为79.5ku,与预期结果相符。抗虫鉴定表明,处理72h时表达的目的蛋白对小菜蛾(Plutella xyllostella)幼虫的致死率达87.88%,明显高于未突变基因对照组的幼虫死亡率;对亚洲玉米螟(Ostrinia nubilalis)幼虫的致死率达81.11%,而且存活的亚洲玉米螟幼虫的生长发育受到明显抑制。【结论】成功克隆了Cry1Ab13-1抗虫基因,且该基因对小菜蛾幼虫和亚洲玉米螟幼虫均具有高效的杀虫活性。
|
| 关 键 词： | 易错PCR；Cry1Ab13基因；原核表达；玉米螟；小菜蛾 |
| 收稿时间： | 2017-03-10 |
Verification of PCR mutagenesis and function of Cry1Ab13 insecticidal gene |
| |
| YAN Ge,SONG Yang and ZHANG Yuting,et al. Verification of PCR mutagenesis and function of Cry1Ab13 insecticidal gene[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2018, 46(5): 141-148 |
| |
| Authors: | YAN Ge SONG Yang ZHANG Yuting et al |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | error-prone PCR Cry1Ab13 gene prokaryotic expression corn borers Plutella xylostella |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(自然科学版)》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《西北农林科技大学学报(自然科学版)》下载全文 |
|
