| 绵羊痘病毒甘肃古浪株RING finger基因的克隆表达及序列分析 |
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| 引用本文： | 陈晓倩,吴国华,郭小腊,杨静,吴金恩,颜鲁军,周雪雁,郑亚东,陈轶霞.绵羊痘病毒甘肃古浪株RING finger基因的克隆表达及序列分析[J].甘肃农业大学学报,2019(3):1-8. |
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| 作者姓名： | 陈晓倩 吴国华 郭小腊 杨静 吴金恩 颜鲁军 周雪雁 郑亚东 陈轶霞 |
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| 作者单位： | 西北民族大学生命科学与工程学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室 |
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| 摘 要： | 【目的】对绵羊痘病毒甘肃古浪株RING finger蛋白的基因进行克隆,表达以及序列分析,初步探究绵羊痘病毒RING finger蛋白是否具有E3泛素连接酶活性,为阐明其在绵羊痘病毒感染过程中对泛素蛋白酶体系统的调控作用奠定基础.【方法】以绵羊痘病毒甘肃古浪株DNA为模板,通过PCR扩增RING finger基因.利用Pfam数据库、DNAstar等软件进行序列及遗传进化分析;将RING finger基因片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-SPPVRFP重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并进行SDS-PAGA和Western-blot分析.【结果】绵羊痘病毒RING finger基因由723个核苷酸组成,编码的240个氨基酸的分子量约为28.5 ku,具有RING finger结构域.不同羊痘病毒株间RING finger基因核苷酸序列同源性高达99.2%,氨基酸序列同源性高达98.3%.不同的RING finger蛋白都含有8个保守的半胱氨酸和组氨酸.SDS-PAGA分析显示,重组SPPVRFP大小约为55 ku,Western-blot分析显示,重组SPPVRFP不能与绵羊痘病毒阳性血清反应.【结论】成功克隆、表达并纯化了绵羊痘病毒RING finger基因,对SPPV GS-GL株RING-finger蛋白进行序列分析,推测其可能具有E3泛素连接酶活性.
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| 关 键 词： | 绵羊痘病毒 RING finger蛋白 序列分析 原核表达 |
Cloning,expression and sequence analysis of RING finger gene of sheeppox virus Gansu Gulang strain |
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