| 大叶石上莲ISSR-PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 傅 琼,王英强. 大叶石上莲ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 热带农业科学, 2017, 37(5): 24-29 |
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| 作者姓名： | 傅 琼 王英强 |
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| 作者单位： | 华南师范大学生命科学学院/广东省植物发育生物工程重点实验室 广东广州 510631;华南师范大学生命科学学院/广东省植物发育生物工程重点实验室 广东广州 510631 |
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| 摘 要： | 为建立并优化大叶石上莲(Oreocharis benthamii)ISSR-PCR反应体系,采用改良的CTAB法提取大叶石上莲叶片DNA,利用正交试验设计方法,从Mg~(2+)、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶以及模板DNA 5因素4水平,对大叶石上莲ISSR-PCR反应体系进行优化,确立了适用于大叶石上莲的扩增多态性高、稳定性强、条带清晰的ISSR最佳反应体系:2.0μL的10×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg~(2+),0.25 mmol/L d NTP,0.7μmol/L引物,2.0 U TaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板(20μL反应体系)。在此基础上,从100条引物中筛选出13条ISSR扩增引物,其中5条引物最为合适并已确定其最佳退火温度。
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| 关 键 词： | 大叶石上莲 ；ISSR ；正交设计 ；反应体系 ；引物筛选 |
Optimization and Establishment of ISSR-PCR Reaction System for Oreocharis benthamii |
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| Affiliation: | Guangdong Key Laboratory of Biotechnology for Plant Development, College of Life Sciences, South China Normal University, Guangzhou, Guangdong 510631;Guangdong Key Laboratory of Biotechnology for Plant Development, College of Life Sciences, South China Normal University, Guangzhou, Guangdong 510631 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Oreocharis benthamii ISSR orthogonal design reaction system primers screening |
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