西瓜食酸菌TA基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测

【目的】构建西瓜食酸菌TA基因的酵母双杂交诱饵载体,为探究TA基因编码产物参与西瓜食酸菌致病的机制奠定基础。【方法】通过PCR扩增TA基因,并定向克隆到载体p GBKT7,获得可用于酵母双杂交的诱饵载体p GBKT7-TA,经酶切鉴定和测序验证为正确后将p GBKT7-TA转化到酵母菌株AH109中;进一步用ADE2、HIS3、Lac Z报告基因活性检测法检测p GBKT7-TA的自激活作用,用固体及液体营养缺陷型培养基培养法检测p GBKT7-TA的毒性作用。【结果】诱饵载体p GBKT7-TA对酵母菌株AH109没有自激活及毒性作用。【结论】所构建的诱饵载体可用于酵母双杂交系统的后续工作,为进一步从被西瓜食酸菌侵染的黄瓜子叶c DNA文库中筛选与TA互作的蛋白奠定了基础。

Construction and Self-activation Detection of Bait Vector for Yeast Two-hybrid System of TA gene in Acidovorax citrulli