| 松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 林世锋,简恒,赵海娟,卜祥霞,刘倩.松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J].植物病理学报,2013,43(2):128-135. |
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| 作者姓名： | 林世锋 简恒 赵海娟 卜祥霞 刘倩 |
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| 作者单位： | 1、 贵州省烟草科学研究院,贵阳 550081; 2、 中国农业大学植物病理学系 农业部植物病理学重点实验室,北京 100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30670278） |
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| 摘 要： | 利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因（Bxvap2）,将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5 %。将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白。用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng·mL-1（效价为1∶1 360 000）,为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 松材线虫 类毒过敏原蛋白 基因优化 原核表达 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2012-01-05; |
Prokaryotic expression of venom allergen-like protein of Bursaphelenchus xylophilus and preparation of its polyclonal antibody |
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| LIN Shi-feng
,
JIAN Heng
,
ZHAO Hai-juan
,
BU Xiang-xia
,
Liu Qian.Prokaryotic expression of venom allergen-like protein of Bursaphelenchus xylophilus and preparation of its polyclonal antibody[J].Acta Phytopathologica Sinica,2013,43(2):128-135. |
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| Authors: | LIN Shi-feng JIAN Heng ZHAO Hai-juan BU Xiang-xia Liu Qian |
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| Institution: | 1.Guizhou Institute of Tobacco Science, Guiyang 550081, China; 2.Department of Plant Pathology, China Agricultural University, Key Laboratory of Molecular Plant Pathology, Ministry of Agriculture, Beijing 100193, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bursaphelenchus xylophilus Bursaphelenchus xylophilus venom allergen-like protein venom allergen-like protein gene optimization prokaryotic expression polyclonal antibody |
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