剑尾鱼CYP1A1基因mRNA定量PCR检测方法的建立 |
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引用本文: | 王英英,李凯彬,刘春,石存斌,吴淑勤.剑尾鱼CYP1A1基因mRNA定量PCR检测方法的建立[J].江苏农业科学,2011,39(6). |
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作者姓名: | 王英英 李凯彬 刘春 石存斌 吴淑勤 |
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作者单位: | 1. 上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州510380 2. 中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州,510380 |
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摘 要: | 利用SYBR GreenⅡ荧光定量PCR技术,建立了剑尾鱼CYP1A1基因mRNA水平的定量分析方法.从苯并芘浸泡诱导后的剑尾鱼肝脏中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定.将所得标准品质粒10倍梯度稀释后构建标准曲线并进行熔解曲线分析.用苯并芘(20 μg/L)对剑尾鱼进行诱导,在第1、3、5、7、9、11天分别取肝脏,RT - PCR检测剑尾CYP1A1基因的相对表达量.建立了剑尾鱼CYP1A1基因表达的检测方法和定量标准曲线,构建的剑尾鱼CYP1A1和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为10 ~26、12~26,扩增效率分别为100.53%、98.40%;建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数r2均在0.99以上;熔解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好,组内变异系数为0.15%~0.83%,组间变异系数为0.86% ~ 1.66%.利用本方法对剑尾CYP1A1基因的相对表达量进行检测,结果表明苯并芘可显著诱导剑尾鱼CYP1A1基因的表达.诱导组剑尾鱼肝脏中CYP1A1相对表达量随着时间呈现先上升后下降的趋势,呈倒“U”形;对照组的CYP1A1相对表达量很低,随时间无明显变化.
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关 键 词: | 剑尾鱼 CYP1A1基因 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅡ |
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