| pEGFP-hTERT真核表达载体的构建及转染牛乳腺细胞方法的优化 |
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| 作者姓名： | 闫晶 贺小英 潘春留 兰志刚 张涌 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学,动物医学院,生物工程研究所,陕西杨陵,712100;西北农林科技大学,动物医学院,生物工程研究所,陕西杨陵,712100;西北农林科技大学,动物医学院,生物工程研究所,陕西杨陵,712100;西北农林科技大学,动物医学院,生物工程研究所,陕西杨陵,712100;西北农林科技大学,动物医学院,生物工程研究所,陕西杨陵,712100 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 针对牛乳腺细胞体外培养存活周期短、转染效率低等特点,分别采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶消化培养法及组织贴壁培养法,比较了牛乳腺细胞的生长、迁移、分化和凋亡等一系列特征.同时构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的端粒酶融合表达载体pEGFP-hTERT,采用脂质体分别转染两种真核表达载体pEGFP-hTERT、pEGFP-C1,通过比较载体不同浓度、传代细胞转染适合密度及生长活力、转染后的荧光强度等检测转染效率.结果表明,第3代细胞接种密度大约70%,浓度为350 ng/μL的载体适合于牛乳腺细胞的转染,转染效率大约为25%.试验结果为牛乳腺细胞体外转基因研究奠定了技术基础.
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| 关 键 词： | 牛乳腺上皮细胞 胶原酶 表达载体 转染 |
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