| 鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备 |
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| 引用本文： | 张舒婕,邓干臻,龚炎长,杨庆磊,胡福利,杨桓,彭秀丽.鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备[J].中国兽医学报,2009,29(4). |
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| 作者姓名： | 张舒婕 邓干臻 龚炎长 杨庆磊 胡福利 杨桓 彭秀丽 |
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| 作者单位： | 华中农业大学,教育部动物遗传育种与繁殖重点实验室,湖北,武汉,430070 |
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| 基金项目： | 湖北省重大科攻关资助项目 |
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| 摘 要： | 根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础.
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| 关 键 词： | 鸭 MHCⅡα基因 克隆 原核表达 纯化 多克隆抗体 |
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