猪圆环病毒2型Cap蛋白双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立 |
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引用本文: | 许兆君,魏荣荣,李玉安,杨豫蒙,姜晓芳,李琛,叶正琴,丁国伟,宋庆庆.猪圆环病毒2型Cap蛋白双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立[J].畜牧与兽医,2018(10). |
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作者姓名: | 许兆君 魏荣荣 李玉安 杨豫蒙 姜晓芳 李琛 叶正琴 丁国伟 宋庆庆 |
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作者单位: | 扬州优邦生物药品有限公司 |
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摘 要: | 为了建立起双抗体夹心ELISA定量测核衣壳蛋白(caspid protein,Cap)抗原方法,采用氯化铯密度梯度超速离心方法制备猪圆环病毒2型Cap蛋白标准品,制备出针对PCV2-Cap单克隆抗体及PCV2-Cap多克隆抗体,筛选最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度,绘制标准曲线,验证方法,并应用该方法对不同转移载体构建的PCV2-Cap蛋白随时间变化的表达量进行测定。结果显示:最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度均为1∶10 000,标准曲线的范围是15.6~250 ng/m L,线性相关系数≥0.99,准确性为(103.46±12.50)%,特异性良好;检测不同转移载体构建的Cap表达量随时间的变化,发现Cap含量接种后24 h开始表达,72 h达到高峰,呈S形曲线增长模式。结果表明:已建立的双抗体夹心ELISA定量测Cap抗原方法灵敏度、精密性和准确性均符合研究要求。
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