绵羊下丘脑神经元细胞培养与鉴定

通过改良神经元细胞体外培养体系,建立一种高效、可行的绵羊下丘脑神经元体外培养方法,为研究绵羊神经内分泌调节体系及季节性发情机理奠定基础。通过Ⅳ型胶原酶将90 d左右的胎羊下丘脑组织消化成单细胞悬液,接种到预先用多聚赖氨酸包被的培养皿中,2 d后更换为无血清培养基进行培养,并采用两种方法对神经元细胞进行鉴定。结果显示:培养2 d的下丘脑神经细胞,胞体较小且单个独立分布。培养4~6 d神经元的突起明显增多增长,神经元胞体变大。培养8 d的神经元细胞更加成熟,突起联系更加紧密,形成密集的神经细胞网络。培养12 d后,下丘脑神经元细胞活性减弱,部分细胞开始凋亡。通过RT-PCR检测发现,培养的下丘脑细胞能够表达神经元特异基因Noggin、TUBA4A,经免疫荧光鉴定下丘脑神经元细胞纯度为95.6%。这些结果表明,通过此细胞培养方法能够获得纯度较高的绵羊下丘脑神经元细胞,为进一步研究绵羊神经内分泌调节体系及季节性发情机理提供目标细胞。