| pEGFP-C1-ApoE真核表达载体的构建及在HEK-293T细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 赵佳福,嵇辛勤,杨远青,段志强,龚婷.pEGFP-C1-ApoE真核表达载体的构建及在HEK-293T细胞中的表达[J].畜牧与兽医,2018(4):1-6. |
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| 作者姓名： | 赵佳福 嵇辛勤 杨远青 段志强 龚婷 |
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| 作者单位： | 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州大学动物科学学院;贵州省毕节市畜禽遗传资源管理站; |
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| 摘 要： | 载脂蛋白E是决定血浆胆固醇水平的重要遗传因素之一,其作为多种脂蛋白的结构蛋白,在脂类的运输和代谢中起着非常重要的作用。本文以脂肪型小型猪从江香猪为研究对象,通过克隆从江香猪载脂蛋白E(ApoE)基因CDS区,构建携带有绿色荧光蛋白的p EGFP-C1-ApoE重组质粒,转染HEK-293T细胞,旨在研究ApoE基因表达产物在真核细胞中的表达情况。序列比对结果表明,从江香猪ApoE基因与Gen Bank上公布的野猪序列相比,有8处发生了碱基突变,其中7处发生在C和G之间,另一处103位T→C的碱基突变,导致丝氨酸(S)突变为稀有密码子脯氨酸(P),使ApoE基因稀有密码子由23个增加到24个;生物信息学分析发现,突变后从江香猪ApoE基因二级、三级结构,蛋白理化性质均发生了改变。信号肽预测软件发现,ApoE蛋白在1-18位氨基酸残基位具有信号肽。荧光共定位实验结果表明,ApoE蛋白在细胞中表达部位与软件预测结果一致,均在细胞质中表达。相关研究为进一步构建ApoE基因转基因动物模型奠定基础。
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| 关 键 词： | 从江香猪 载体构建 HEK-293T细胞 细胞转染 基因表达 |
Construction of eukaryotic expression vector of pEGFP-C1-ApoE and its expressions in HEK-293T cells |
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