山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备 |
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作者姓名: | 安贝 赵玄多 杨雯昱 侯伟杰 高洋 陈德坤 |
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作者单位: | 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌,712100 |
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摘 要: | 为获得山羊IFN-γ重组蛋白,提取山羊外周血淋巴细胞总 RNA,反转录得到 cDNA,以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区,构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列,连入重组表达载体 pET-32a,转入 BL21(Codon Plus)感受态细胞中,测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后,对产物进行SDS-PAGE分析,并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示,编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432 bp;SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为34.9 ku,在30℃条件下,以0.3 mmol/L的IPTG诱导6 h,可得到大量可溶性表达的目的蛋白;间接 ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。
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关 键 词: | 山羊 IFN-γ 基因克隆 原核表达 抗体制备 |
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