植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因(melA)的克隆与序列分析 |
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引用本文: | 任大勇,李昌,秦艳青,杜寿文,胡博,金宁一.植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因(melA)的克隆与序列分析[J].中国畜牧兽医,2011,38(1):95-99. |
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作者姓名: | 任大勇 李昌 秦艳青 杜寿文 胡博 金宁一 |
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作者单位: | (1.吉林大学农学部畜牧兽医学院,吉林长春 130062; 2.军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春 130062;3.吉林农业大学食品科学与工程学院,吉林长春 130118) |
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基金项目: | 重大传染病专项(2008ZX10004-015); 军内十一五科技攻关项目(06G127); 吉林省高新技术产业发展项目(2010); 长春市科技特派员行动计划(09KT04) |
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摘 要: | 试验以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增α-半乳糖苷酶基因(melA)基因,PCR产物经纯化回收后克隆至pMD18-T载体中,转化E.coli DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒进行SacⅠ和Sph Ⅰ酶切及PCR扩增鉴定,并对melA基因片段进行序列测定。结果表明,测得的melA基因序列全长2240 bp,含有酶切位点、启动子、SD序列及编码738个氨基酸的开放阅读框,理论分子质量为84 ku;4种核苷酸中GC含量为47.45%、AT含量为52.55%;序列中有3个碱基发生了变化,均为无义突变,未导致其推导的氨基酸的改变;序列测定结果与GenBank中登录的序列进行比较,核苷酸和氨基酸序列的同源性除与AY873840相比分别为96.6%和92.2%外,其余均大于99%。试验成功克隆了melA基因,为进一步构建重组表达载体奠定了基础。
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关 键 词: | 植物乳杆菌 α-半乳糖苷酶 分子克隆 序列分析 |
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