| 共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价 |
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| 引用本文： | 丁轲,余祖华,李旺,闫文朝,王臣,赵战勤,程相朝,张春杰,王天奇,程安春,汪铭书.共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价[J].畜牧兽医学报,2013(2):262-269. |
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| 作者姓名： | 丁轲 余祖华 李旺 闫文朝 王臣 赵战勤 程相朝 张春杰 王天奇 程安春 汪铭书 |
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| 作者单位： | 河南科技大学动物疫病与公共安全院士工作站;河南科技大学功能微生物与免疫重点实验室;四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31101744);洛阳市科技特派员项目(0903042A) |
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| 摘 要： | 笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV)VP3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌,评价口服表达融合蛋白GPV VP3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将VP3基因和IL-2基因连接,并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP,亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67,电转化入干酪乳杆菌L.CECT5276,SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVVP3-gIL2融合蛋白的表达活性。将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清GPV抗体、小肠黏液sIgA和脾淋巴细胞增殖情况,评价其免疫效果。结果表明,酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pMJ-SP-GPVVP3-gIL2,PCR证实质粒pMJ-SP-GPVVP3-gIL2成功整合到乳酸杆菌基因组;Western blot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白GPVVP3-gIL2能与GPV阳性血清特异性结合;淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖,且在第4、5、6周明显高于GPV VP3组和gIL2组;重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗VP3蛋白抗体,且具有中和活性的抗体显著高于GPV VP3组;小肠黏液sIgA细胞生成的数量自第2周较GPV VP3组和疫苗组显著上升。动物攻毒试验结果显示GPV VP3-gIL2融合蛋白免疫组能够获得85%的保护率,表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对GPV的攻击具有较好的免疫保护作用。本试验成功构建能稳定表达GPV VP3-IL2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌,为研究其作为口服疫苗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鹅细小病毒(GPV) VP3 鹅白细胞介素-2(IL-2) 乳酸杆菌 共表达 口服免疫 融合蛋白 |
Construction of Recombinant Lactobacillus Co-expressed GPV VP3-gIL2 and Oral Immune Effect to Goose |
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| DING Ke,YU Zu-hua,LI Wang,YAN Wen-chao,WANG Chen,ZHAO Zhan-qin,CHENG Xiang-chao,ZHANG Chun-jie,WANG Tian-qi,CHENG An-chun,WANG Ming-shu.Construction of Recombinant Lactobacillus Co-expressed GPV VP3-gIL2 and Oral Immune Effect to Goose[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2013(2):262-269. |
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| Authors: | DING Ke YU Zu-hua LI Wang YAN Wen-chao WANG Chen ZHAO Zhan-qin CHENG Xiang-chao ZHANG Chun-jie WANG Tian-qi CHENG An-chun WANG Ming-shu |
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| Institution: | 1.Animal Disease and Public Safety Academician Workstation,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;2.Key Laboratory of Functional Microbial and Immunity,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;3.Avian Disease Research Center,College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014,China) |
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