新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响 |
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作者姓名: | 王宏宇 田志飘 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 |
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作者单位: | 1. 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;2. 盐城师范学院药学院;3. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;4. 盐城师范学院江苏省肿瘤靶向纳米诊疗材料工程研究中心 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(32272995); |
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摘 要: | 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-C...
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关 键 词: | 新型冠状病毒 Nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译 |
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