| 新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响 |
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| 引用本文： | 王宏宇,田志飘,刘红线,郑亮,于雯,吴志军,Matthew Kay,高振秋,曹宏伟,耿荣庆,张华.新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响[J].黑龙江八一农垦大学学报,2024(1):84-90. |
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| 作者姓名： | 王宏宇 田志飘 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 |
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| 作者单位： | 1. 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;2. 盐城师范学院药学院;3. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;4. 盐城师范学院江苏省肿瘤靶向纳米诊疗材料工程研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（32272995）； |
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| 摘 要： | 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2）的毒力决定因子，在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能，成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体，并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后，利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定，SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中，经嘌呤霉素标记后，利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明，重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达，并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译，为更深入研究SARS-C...
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| 关 键 词： | 新型冠状病毒 Nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译 |
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