| 血清4型禽腺病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 吴双,张聪,袁慧莎,戴利霞,林梦舟,吴植,朱善元.血清4型禽腺病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].江苏农业学报,2023(1):134-141. |
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| 作者姓名： | 吴双 张聪 袁慧莎 戴利霞 林梦舟 吴植 朱善元 |
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| 作者单位： | 1. 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;2. 和盛食品集团有限公司 |
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| 基金项目： | 江苏高校“青蓝工程”项目[苏教师函(2020)10号]；;江苏省高等学校自然科学研究重大项目(21KJA230001)；;江苏省2019年度高校优秀科技创新团队项目； |
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| 摘 要： | 为建立快速检测血清4型禽腺病毒病(Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4)的基于TaqMan探针的Quantitative real-time PCR(qPCR)检测方法，本研究根据Hexon基因序列，设计相关的qPCR特异性引物和探针，经特异性、敏感性和重复性试验以及反应程序等系列优化后，最终建立荧光定量检测方法并应用于临床样品的病原检测。FAdV-4的qPCR结果表明，优化后标准曲线决定系数(R2)为0.998,扩增效率(E)为95.226%,该方法效果良好。利用该方法，除FAdV-4外其他禽类常见病原均未检测到，该方法具有良好的特异性。该qPCR方法检出阳性的最低拷贝数为100个拷贝，而普通PCR方法检出阳性的最低拷贝数为10 000个拷贝，说明其具有良好的灵敏度。组内和组间变异系数均≤0.22%,该方法的重复性较高。对180份从江苏、安徽、江西和广西等省份采集的临床疑似样品进行检测，结果显示，qPCR方法检出率为51.1%,而普通PCR方法检出率为32.8%;同时基于qPCR引物的检出符合率为100.00%,而基于普通PC...
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| 关 键 词： | 血清4型禽腺病毒 荧光定量PCR 临床应用 |
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