牦牛源产气荚膜梭菌β2基因的原核表达及生物信息学分析

为了原核表达一株牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的β2基因及了解其编码蛋白的生物信息。首先利用PCR扩增技术、基因克隆技术构建原核表达质粒并通过高通量测序、双酶切技术、SDS-PAGE检测和Western blotting方法对表达情况进行鉴定，其次利用生物信息学分析的方法对β2毒素蛋白的一级结构、二级结构、蛋白特殊区域、三级结构及B细胞线性抗原表位等多方面进行预测分析。原核表达结果显示：牦牛源产气荚膜梭菌β2基因在温度为37℃，IPTG浓度为1.5 mmoL/L，培养时间为8 h～10 h的条件下可得到大小约为28KD的可溶于细胞质的不含信号肽的目的蛋白。生物信息学分析结果显示：牦牛源产气荚膜梭菌β2基因大小为798 bp，共编码265个氨基酸，与印度的产气荚膜梭(FR687302.1)的β2毒素基因相似性最高；其分子式为C₁₃₉₂H₂₁₃₆N₃₅₆O₄₁₈S₁₁，分子量为30.9 ku,pI=6.04，负电荷(Asp+Glu)残基总数36个，正电荷(Arg+Lys)残基...