| 基于重组毕赤酵母的鳜鱼β-防御素生物合成及其抑菌活性 |
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| 引用本文： | 吕星星,王莎莎,赵震,陶妍,谢晶,钱韻芳. 基于重组毕赤酵母的鳜鱼β-防御素生物合成及其抑菌活性[J]. 上海海洋大学学报, 2020, 29(4): 568-577 |
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| 作者姓名： | 吕星星 王莎莎 赵震 陶妍 谢晶 钱韻芳 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学 食品学院,上海 201306;上海海洋大学 食品学院,上海 201306;上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心,上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家“十三五”重点研发计划(NO. 2016YFD0400106)资助项目 |
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| 摘 要： | 鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)多肽链由N端的信号肽和C端的成熟肽组成,通过构建产鳜鱼β-防御素的毕赤酵母重组菌株,以解决天然免疫小分子抗菌肽的来源问题。通过RT-PCR从鳜鱼脾脏中分离编码β-防御素成熟肽的基因ScBD,将其与表达载体pPICZαA连接后构建重组表达载体pPICZαA-ScBD并转入毕赤酵母X-33;通过含高浓度博来霉素的YPD平板筛选阳性转化子后,于28℃、250 r/min和pH 6.0的条件下,使用1%甲醇诱导表达96 h;经镍离子亲和层析对重组毕赤酵母菌株的产物进行纯化,并对纯化产物进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定;通过平板涂布法和浊度法检测该重组菌株产物的抑菌活性。结果表明:基于质谱分析的一级结构鉴定证明纯化产物为分子量6.35 ku的预期重组ScBD;抑菌实验显示重组菌株产物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)的抑制率分别为94.34%、86.97%和85.92%。本文构建的重组毕赤酵母菌株能有效合成具有生物学活性的重组ScBD,为鱼类来源天然小分子抗菌肽的进一步开发提供了技术途径。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 重组表达 鳜鱼 β-防御素 抑菌活性 |
| 收稿时间： | 2019-10-17 |
| 修稿时间： | 2020-01-19 |
Biosynthesis of Siniperca chuatsi b-defensin based on recombinant Pichia pastoris and its antibacterial activity |
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| LYU Xingxing,WANG Shash,ZHAO Zhen,TAO Yan,XIE Jing,QIAN Yunfang. Biosynthesis of Siniperca chuatsi b-defensin based on recombinant Pichia pastoris and its antibacterial activity[J]. Journal of Shanghai Ocean University, 2020, 29(4): 568-577 |
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| Authors: | LYU Xingxing WANG Shash ZHAO Zhen TAO Yan XIE Jing QIAN Yunfang |
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| Affiliation: | College of food science and technology, Shanghai Ocean University,College of food science and technology, Shanghai Ocean University,College of food science and technology, Shanghai Ocean University,College of food science and technology, Shanghai Ocean University,College of food science and technology, Shanghai Ocean University,College of food science and technology, Shanghai Ocean University |
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