| 整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用 |
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| 引用本文： | 刘旭,马立才,赵姝,李健,王元,房文红. 整合子相关元件多重PCR检测技术建立及其在弧菌中应用[J]. 上海海洋大学学报, 2016, 25(6): 814-821 |
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| 作者姓名： | 刘旭 马立才 赵姝 李健 王元 房文红 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学,中国水产科学研究院东海水产研究所 |
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| 基金项目： | 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（东海水产研究所L-2015-1602）；上海市科技兴农重点攻关项目（沪农科攻字（2014）第3-4号） |
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| 摘 要： | 为了建立一种能同时检测1类整合子、4类超级整合子和1型插入序列共同区的多重PCR检测方法,根据Gen Bank中1类整合子整合酶基因int1、4类超级整合子整合酶基因intSXT和1型插入序列共同区转座酶基因ISCR1的序列,应用Primer Plex 2.61设计3对特异性引物,通过改变引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行了优化。此后,评价了所建立多重PCR体系的特异性和灵敏度,并应用于222株海水养殖源弧菌中3种整合子相关元件的检测。结果显示,设计的3对引物能分别单独且特异性地扩增出569 bp、430 bp和651 bp的目的条带;当int1、intSXT和ISCR13对引物(10 pmol/μL)的体积依次为0.3μL、0.6μL和0.6μL,退火温度为50℃时,多重PCR体系能特异性地扩增出3个条带清晰、区分度良好的目的条带,方法的灵敏度达到0.02 ng/μL弧菌基因组模板DNA;利用所建立的方法对222株临床分离弧菌进行3种整合子元件检测得到的结果与文献报道的单引物检测结果一致。从上述研究结果可以看出,该多重PCR方法能快速准确地检测Int1、SXT和ISCR1,适用于整合子相关元件流行监测及整合子相关的耐药性研究。
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| 关 键 词： | 多重PCR；整合子；SXT；ISCR1；弧菌 |
| 收稿时间： | 2016-03-02 |
| 修稿时间： | 2016-06-26 |
Development of multiplex PCR detection of integron-related elements and its application in Vibrio spp. |
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| LIU Xu,MA Licai,ZHAO Shu,LI Jian,WANG Yuan and FANG Wenhong. Development of multiplex PCR detection of integron-related elements and its application in Vibrio spp.[J]. Journal of Shanghai Ocean University, 2016, 25(6): 814-821 |
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| Authors: | LIU Xu MA Licai ZHAO Shu LI Jian WANG Yuan FANG Wenhong |
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| Affiliation: | Shanghai Ocean University,East China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fisheries Science |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Multiplex PCR Integron SXT ISCR1 Vibrio |
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