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| 戊型肝炎病毒ORF3蛋白的原核表达和纯化 | |
| 引用本文： | 傅艳琨,郭亮,吴更,华修国,崔立. 戊型肝炎病毒ORF3蛋白的原核表达和纯化[J]. 上海交通大学学报(农业科学版), 2013, 31(4): 76-82 |
| 作者姓名： | 傅艳琨 郭亮 吴更 华修国 崔立 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学农业与生物学院,上海市兽医生物技术重点实验室,上海200240;上海交通大学生命科学与技术学院,微生物代谢国家重点实验室,上海200240 2. 上海交通大学生命科学与技术学院,微生物代谢国家重点实验室,上海200240 3. 上海交通大学农业与生物学院,上海市兽医生物技术重点实验室,上海200240 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目，农业部公益性行业(农业)科研专项 |
| 摘 要： | 戊型肝炎病毒(HEV)是一种无包膜、单股正链RNA病毒,其基因组长约7.2kb,包含3个开放阅读框(ORF)。ORF3位于ORF1和ORF2之间,编码含有123个氨基酸的磷酸化蛋白。本文通过PCR扩增HEV ORF3基因,将扩增产物双酶切后,插入具有相同多克隆位点的pET28a(+)、pGEX-4T-1和pET-43.1a(+)载体中,构建pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3原核表达载体。将重组质粒转入E.coli DH5α,菌液PCR筛选阳性结果。序列测定正确后,将其转化E.coli BL21(DE3),加入IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析目的蛋白表达后,进一步利用亲和层析法纯化目的蛋白。结果表明,成功构建了原核表达载体pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3,所构建的载体均可在宿主菌E.coli BL21(DE3)中表达ORF3蛋白。通过Ni-TNA和GSH-Sepharose层析纯化分别分析3种融合蛋白,发现pET43a-ORF3最适合获得纯化蛋白的ORF3蛋白,这为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 戊型肝炎病毒 原核表达 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2012-10-29 |
Prokaryotic Expression and Purification of the Protein of Hepatitis E Virus ORF3 |
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| FU Yan-kun,GUO Liang,WU Geng,HUA Xiu-guo and CUI Li. Prokaryotic Expression and Purification of the Protein of Hepatitis E Virus ORF3[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University (Agricultural Science), 2013, 31(4): 76-82 | |
| Authors: | FU Yan-kun GUO Liang WU Geng HUA Xiu-guo CUI Li |
| Affiliation: | 1(1.Shanghai Key Lab of Veterinary Biotechnology,School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200240,China;2.State Key Lab of Microbial Metabolism, School of Life Science and Biotechnology,Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200240,China) |
| Abstract: | |
| Keywords: | hepatitis E virus prokaryotic expression protein purification |
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