| 玉米病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析 |
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| 引用本文： | 王静,刘丽,张志明,赵茂俊,潘光堂.玉米病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2012(1):35-42. |
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| 作者姓名： | 王静 刘丽 张志明 赵茂俊 潘光堂 |
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| 作者单位： | 四川农业大学玉米研究所/教育部作物基因资源与遗传改良重点实验室/农业部西南玉米生物学与遗传育种重点实验室;四川农业大学生命科学与理学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(0900901);农业部“高产转基因玉米新品种培育”资助项目(2008ZX08003-003);四川省教育厅重点资助项目(07ZA063) |
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| 摘 要： | 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从耐玉米穗粒腐病自交系R15中分离得到病程相关蛋白1(pathogenesis-related protein 1,PR1)基因的开放阅读框,命名为ZmPR1,测序结果显示该序列长为528bp,编码175个氨基酸,其蛋白质分子质量为18.7ku.利用NCBI/Blastp和Genedoc软件进行同源性比对显示,ZmPR1基因编码蛋白与水稻、小麦、拟南芥等高等植物中的PR1蛋白相似性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich secretory protein,CAP)的保守结构域.将构建的重组载体pET32a(+)-ZmPR1在宿主菌Escherichia coli BL21中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,在不同的诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,ZmPR1基因的最佳诱导条件为IPTG终浓度0.6mmol爛L-1,诱导温度28℃,且诱导时间对表达量影响不大.免疫印迹(Western blot)检测证实有39ku的融合蛋白表达,表明ZmPR1基因在大肠杆菌中已成功表达,这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备提供了一定的基础.
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| 关 键 词： | 玉米穗粒腐病 病程相关蛋白 原核表达 表达分析 |
Cloning and expression analysis of pathogenesis-related protein 1 gene in maize |
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| WANG Jing,LIU Li,ZHANG Zhi-ming,ZHAO Mao-jun,PAN Guang-tang.Cloning and expression analysis of pathogenesis-related protein 1 gene in maize[J].Journal of Zhejiang University(Agriculture & Life Sciences),2012(1):35-42. |
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| Authors: | WANG Jing LIU Li ZHANG Zhi-ming ZHAO Mao-jun PAN Guang-tang |
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| Institution: | 1(1.Maize Research Institute / Key Laboratory of Crop Genetic Resources and Improvement of Ministry of Education / Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Maize for Southwest China,Ministry of Agriculture,Sichuan Agricultural University,Wenjiang,Sichuan 611130,China;2.College of Life and Basic Sciences,Sichuan Agricultural University,Ya′an,Sichuan 625014,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | maize kernel rot pathogenesis-related protein prokaryotic expression expression analysis |
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