矮生山茶‘恨天高’GA20ox1的克隆及其对转基因烟草株形的影响

根据山茶（Camellia japonica）同源序列设计特异性引物，利用同源克隆和3′,5′-RACE技术，从云南山茶（C. reticulata）矮生品种‘恨天高’茎尖组织中克隆出GA20–氧化酶（GA20-oxidase，GA20ox）基因，命名为CrGA20ox1（GenBank登录号：KP635268），基因全长1 178 bp，开放阅读框1 146 bp，编码381个氨基酸。实时荧光定量PCR分析发现，GA20ox1在4种不同的山茶中均得到表达，其中乔木类的浙江红山茶（C. chekiangoleosa）GA20ox1表达量最高，其次是岳麓连蕊茶（C. handelii）及金花茶（C. nitidissima），表达量最低的为矮生品种‘恨天高’。结果表明该基因的表达量高低与测试物种的株高有关。GA20ox1在4个物种不同组织中的表达模式基本一致，且在茎尖组织中的表达量均高于叶片。CrGA20ox1转基因烟草分析结果表明，过表达CrGA20ox1烟草株高约为野生型的3.6倍，而沉默表达 CrGA20ox1烟草株高约为野生型的一半。