| 鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用 |
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| 引用本文： | 许晨,周勇,史玉恒,范玉顶,刘文枝,江南,赵建青,曾令兵.鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用[J].淡水渔业,2019(1):27-32. |
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| 作者姓名： | 许晨 周勇 史玉恒 范玉顶 刘文枝 江南 赵建青 曾令兵 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院长江水产研究所 |
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| 摘 要： | 为深入研究鲤疱疹病毒Ⅱ型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库。以CyHV-2 ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体。结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×10~6 CFU/μg,滴度为1.24×10~6 CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5 kb左右。将表达CyHV-2 ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础。
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| 关 键 词： | 酵母双杂交 鲫脑组织细胞cDNA文库 鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25编码蛋白 蛋白质的互作 |
Construction and preliminary application of the yeast two-hybrid cDNA library from gibel carp brain cells |
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