| 鱼类致病荧光假单胞菌外膜蛋白LolB多克隆抗体制备、鉴定与免疫活性分析 |
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| 引用本文： | 晁 嘉,简思杰,孙 薇,陈 锐,丁 锐,陈 琛,刘 祥.鱼类致病荧光假单胞菌外膜蛋白LolB多克隆抗体制备、鉴定与免疫活性分析[J].西北农业学报,2023(10):1521-1533. |
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| 作者姓名： | 晁 嘉 简思杰 孙 薇 陈 锐 丁 锐 陈 琛 刘 祥 |
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| 作者单位： | （1.陕西理工大学 生物科学与工程学院 中德天然产物研究所，陕西汉中 723001；2.阜阳师范大学 生物与食品工程学院,安徽阜阳 236037；3.陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心,陕西汉中 723001；4.陕西理工大学，秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室（培育）,陕西汉中 723001；5.陕西省资源生物重点实验室,陕西汉中 723001） |
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| 基金项目： | 陕西省科技厅面上项目（2022JM-120）；安徽省教育厅重点项目（2022AH051330）；国家外国专家局项目（GDT20186100426）。 |
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| 摘 要： | 以荧光假单胞菌的外膜蛋白LolB为研究对象，评价其免疫学功能。生物信息学分析各菌株间LolB的亲缘关系；分子克隆构建LolB蛋白的表达菌株并确定最佳诱导表达条件；SDS-PAGE切胶纯化LolB蛋白并免疫红鲫；Western blotting检测红鲫LolB血清的特异性与效价，ELISA体外模拟红鲫LolB血清与荧光假单胞菌的相互识别作用，免疫因子(ACP、AKP、LZM、IgM)与细胞吞噬作用测定，抗氧化因子(CAT、SOD、MDA、GSH-Px)、炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达分析及组织病理学探究LolB蛋白的免疫保护作用。结果显示，LolB在假单胞菌属间同源性和亲缘性更近，LolB抗血清可能提供交叉免疫保护作用。原核表达纯化LolB蛋白，获得最佳诱导表达条件。红鲫LolB抗血清具有较好特异性，效价达1∶200;且抗血清与荧光假单胞菌在体外存在相互识别作用；免疫因子以及细胞吞噬作用均呈上升趋势，表明LolB激活红鲫的非特异性免疫。红鲫免疫LolB蛋白攻毒荧光假单胞菌后，抗氧化因子以及炎症因子呈下降趋势，表明LolB蛋白具有抗氧化和消炎作用；组织病理学切片显示LolB蛋白保护...
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| 关 键 词： | 荧光假单胞菌 外膜蛋白LolB 主动免疫 组织病理学 红鲫 |
Preparation,Identification and Immunoactivity Analysis of Polyclonal Antibody of Outer Membrane Protein LolB of Fish Pathogenic Pseudomonas fluorescens |
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| CHAO Ji,JIAN Sijie,SUN Wei,CHEN Rui,DING Rui,CHEN Chen and LIU Xiang.Preparation,Identification and Immunoactivity Analysis of Polyclonal Antibody of Outer Membrane Protein LolB of Fish Pathogenic Pseudomonas fluorescens[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2023(10):1521-1533. |
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| Authors: | CHAO Ji JIAN Sijie SUN Wei CHEN Rui DING Rui CHEN Chen and LIU Xiang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudomonas fluorescens Outer membrane protein LolB Active immunity Histopathological section Carassius auratus |
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