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薰衣草ISSR-PCR反应体系的正交优化
作者姓名:苏秀娟  刘建喜  徐海江  曲延英  陈全家
作者单位:新疆农业大学农学院;新疆农业大学农业生物技术重点实验室;新疆兵团种子管理总站;新疆农业科学院经济作物研究所
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划青年教师科研启动基金(XJEDU2012S13);国家自然科学基金(31460383);新疆农业大学校前期课题(XJAU201017)共同资助
摘    要:本研究以19份薰衣草品种为材料,采用正交设计对ISSR-PCR反应中的5个影响因素:DNA浓度、Taq DNA聚合酶用量、Mg2+浓度、引物浓度、d NTP浓度,进行5个水平的优化试验,并在48℃~59℃范围内摸索退火温度。研究结果建立了稳定的、可重复的薰衣草ISSR最佳反应体系和PCR扩增参数。在20μL的反应体系中,DNA模板浓度为2.50 ng/μL,Mg2+浓度为2.00 mmol/L,d NTP浓度为0.20 mmol/L,引物浓度为0.40μmol/L,Taq DNA聚合酶为0.75 U,退火温度为52℃。该体系可为开展薰衣草种质资源的遗传多样性分析评价奠定基础。

关 键 词:薰衣草  ISSR  正交设计  6个因素  5个水平
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