| 牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 房红莹,陈钜豪,张欣,胡寻,罗满林. 牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 华南农业大学学报, 2009, 30(1) |
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| 作者姓名： | 房红莹 陈钜豪 张欣 胡寻 罗满林 |
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| 作者单位： | 华南农业大学,兽医学院,广东,广州,510642;苏州大学,医学院,江苏,苏州,215123;华南农业大学,兽医学院,广东,广州,510642 |
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| 基金项目： | 广东省省级动物防疫检疫研究专项基金 |
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| 摘 要： | 根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.
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| 关 键 词： | 牛白细胞介素15 基因克隆 原核表达 |
Cloning and Expression of Bovine Interleukin-15 in Escherichia coli |
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| FANG Hong-ying,CHEN Ju-hao,ZHANG Xin,HU Xun,LUO Man-lin. Cloning and Expression of Bovine Interleukin-15 in Escherichia coli[J]. JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY, 2009, 30(1) |
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| Authors: | FANG Hong-ying CHEN Ju-hao ZHANG Xin HU Xun LUO Man-lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine interleukin-15(IL-15) gene cloning prokaryotic expression |
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