凹叶厚朴TRAP-PCR体系建立

结合均匀试验与正交试验对影响目标区域扩增多态性—聚合酶链式反应(TRAP-PCR)效果的5个关键因素(DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物及Taq酶)进行优化研究,建立了适用于凹叶厚朴目标区域扩增多态性(TRAP)分析体系。凹叶厚朴TRAP-PCR最优反应体系:总体积25μL,含模板DNA 40 ng,Mg2+1.5 mmol·L-1,dNTPs 0.28 mmol·L-1,固定引物及随机引物0.3μmol·L-1,Taq DNA聚合酶0.75 U。PCR扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,40℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;将退火温度升至50℃,其它条件不变进行38个循环;72℃延伸10 min。利用所得优化体系对16个不同种源凹叶厚朴进行扩增,结果表明该体系效果较好,可应用于凹叶厚朴相关研究。