水仙SSR分子标记PCR反应体系的建立与优化 |
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引用本文: | 祁世明,潘东明,潘腾飞,佘文琴.水仙SSR分子标记PCR反应体系的建立与优化[J].福建林学院学报,2014(2). |
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作者姓名: | 祁世明 潘东明 潘腾飞 佘文琴 |
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作者单位: | 福建农林大学园艺学院;福建农林大学园艺产品贮运保鲜研究所; |
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基金项目: | 国家科技支撑计划项目(2007BAD07B00);福建农林大学创新团队基金项目(cxtd12013);福建省林业厅2013年花卉苗木品种引进与研发创新基金项目(闽林种站[2013]42号) |
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摘 要: | 利用单因素梯度试验与正交试验相结合、方差分析与多重比较分析相结合的方法,对水仙简单重复序列—聚合酶链式反应(SSR-PCR)扩增反应体系中的4个因素(DNA、dNTPs、引物及Taq酶)进行优化分析,方差分析表明4个因素对SSR-PCR的影响均达到极显著水平,通过多重比较分析发现SSR引物和Taq酶对总体系的扩增结果影响最大。根据单因素梯度试验与正交试验结果,建立了适合水仙SSR标记分析的最优PCR反应体系:DNA模板2.5 ng·μL-1,10×PCR Buffer(含1.5 mmol·L-1Mg2+),dNTPs 0.25 mmol·L-1,上下游引物各0.50μmol·L-1,Taq酶1.00 U,总体积20μL。该优化体系的建立可为今后水仙SSR分析提供标准化的试验体系,为水仙种质鉴定、品种指纹图谱绘制、遗传多样性分析、群居遗传结构研究和遗传连锁图谱分析等领域提供技术支持。
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关 键 词: | 水仙 简单重复序列 体系优化 正交设计 多重比较 |
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