| 豌豆肌动蛋白异型体PEAc3的原核表达及其聚合特性分析 |
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| 引用本文： | 张少斌,刘曦,刘国琴. 豌豆肌动蛋白异型体PEAc3的原核表达及其聚合特性分析[J]. 中国农业大学学报, 2010, 15(3): 1-6 |
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| 作者姓名： | 张少斌 刘曦 刘国琴 |
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| 作者单位： | 1. 沈阳农业大学,生物科学技术学院,沈阳,110161
2. 中国农业大学,植物生理生化国家重点实验室,北京,100193 |
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| 基金项目： | 植物生理生化国家重点实验室开放课题，辽宁省教育厅项目，沈阳农业大学中青年导师基金项目 |
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| 摘 要： | 植物肌动蛋白在植物顶端生长、细胞分裂分化和细胞信号转导等多种生命活动中发挥着重要作用.豌豆中存在多种肌动蛋白异型体.研究豌豆肌动蛋白异型体PEAc3与组氨酸标签(His-tag)及绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达,并分析了融合蛋白的聚合特性.采用RT-PCR的方法克隆PEAc3基因,构建原核表达载体pET30a-His-PEAc3-GFP.用DNAman生物学软件分析表明,PEAc3融合蛋白全长675个氨基酸,分子量74.74 ku,等电点5.81.将pET30a-His-PEAc3-GFP转入大肠杆菌BL21中,优化的诱导表达条件为:25℃,当菌液OD600达到0.8时加入IPTG(浓度0.1 mmol/L),诱导表达4 h.采用尿素变性复性、镍柱亲和层析的方法从包涵体中纯化获得高纯度融合蛋白.融合蛋白His-PEAc3一GFP能够体外聚合,聚合临界浓度为0.5 μmol/L.单体His-PEAc3-GFP对DnaseⅠ有抑制作用,聚合后对肌球蛋白Mg-ATPase活性有一定的激活作用.上述结果表明,原核表达的His-PEAc3-GFP可能具有类似于一般肌动蛋白的聚合特性.
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| 关 键 词： | 豌豆 肌动蛋白 异型体 诱导表达 聚合特性分析 |
| 收稿时间： | 2009-11-30 |
Prokaryotic expression and polymerization properties analysis ofa pea actin isoform3 (PEAc3) |
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| ZHANG Shao-bin,LIU Xi and LIU Guo-qin. Prokaryotic expression and polymerization properties analysis ofa pea actin isoform3 (PEAc3)[J]. Journal of China Agricultural University, 2010, 15(3): 1-6 |
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| Authors: | ZHANG Shao-bin LIU Xi LIU Guo-qin |
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| Affiliation: | ZHANG Shao-bin1,LIU Xi1,LIU Guo-qin2(1.Biological Science and Technology College,Shenyang Agricultural University,Shenyang 110161,China,2.National Key Laboratory of Plant Physiology and Biochemistry,China Agricultural University,Beijing 100193,China) |
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| Abstract: | Plant actins play very important role in many living process,such as apical growth,cell division or differentiation,signal transduction.There are many actin isoforms in pea.In this paper,PEAc3 fused with His-tag and green fluorescence protein(GFP) was expressed in E.Coli,and the polymerization properties of the fusion protein were analyzed.The gene of PEAc3 was cloned by RT-PCR,and a prokaryotic expression vector of pET30a-His-PEAc3-GFP was constructed.The fusion protein has 674 amino acids,the molecular we... |
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| Keywords: | pea actin isoform induction expression polymerization analysis |
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