| 肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 赵素君,曹冶,谢晶,李江凌,王秋实,叶勇刚,罗丹丹,叶健强,廖党金.肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立[J].动物医学进展,2012(11):8-11. |
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| 作者姓名： | 赵素君 曹冶 谢晶 李江凌 王秋实 叶勇刚 罗丹丹 叶健强 廖党金 |
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| 作者单位： | 四川省畜牧科学研究院 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目(2006BAD04A17,2012BAD12B03);四川省科技支撑计划项目(2010NZ0106) |
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| 摘 要： | 由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。
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| 关 键 词： | 肠毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素基因 叠氮溴乙锭-聚合酶链反应 检测 |
Establishment of Method for Detecting Heat-labile Enterotoxin Subunit A of Enterotoxigenic E. coli by EMA-PCR |
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| ZHAO Su-jun,CAO Ye,XIE Jing,LI Jiang-ling,WANG Qiu-shi,YE Yong-gang, LUO Dan-dan,YE Jian-qiang,LIAO Dang-jin.Establishment of Method for Detecting Heat-labile Enterotoxin Subunit A of Enterotoxigenic E. coli by EMA-PCR[J].Progress In Veterinary Medicine,2012(11):8-11. |
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| Authors: | ZHAO Su-jun CAO Ye XIE Jing LI Jiang-ling WANG Qiu-shi YE Yong-gang LUO Dan-dan YE Jian-qiang LIAO Dang-jin |
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| Institution: | (Sichuan Animal Science Academy,Chengdu,Sichuan,610066,China) |
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